目的:探讨二氢嘧啶脱氢酶基因(DPYD)T85C位点突变对乳腺癌细胞5-氟尿嘧啶(5-FU)敏感性的影响.方法:从肝脏组织中提取mRNA,扩增得到野生型DPYD编码序列.利用定点突变技术,获得T85C定点突变的DPYD编码序列.将GFP、野生型和突变型DPYD序列,连入PCDH-CMV-MCS-EF1-Puro载体.转染上述3种质粒到MDA-MB-231细胞中,获得稳定表达的细胞株.MTT法检测不同浓度5-FU(0、1、5、10、50 μg/mL)处理24h后,细胞存活情况.结果:酶切验证3种重组质粒,观察到目的序列.测序验证定点突变质粒,突变位点发生T到C的改变.相比对照组,突变型细胞的存活率显著增高(P＜0.01),且突变型细胞存活率高于野生型(P＜0.05).结论:DPYD基因突变影响乳腺癌细胞对5-FU敏感性,T85C突变型DPYD细胞对5-FU的敏感性显著降低.
作者：黄勇；吕欣；王伟；马勇杰
来源：天津医科大学学报 2017 年 23卷 6期
