目的 观察结直肠癌中Ki-67阴性(Ki-67-/low)细胞在肿瘤增殖及自我更新(self-renew)中的作用,探讨将Ki-67-/low作为分离肿瘤干细胞标记物的应用.方法 通过将人结直肠癌标本消化成为单细胞,感染Ki-67启动子驱动GFP表达(pKi-67-GFP)的慢病毒后,注射至NOD/SCID小鼠背部建立pKi-67-GFP结直肠癌移植瘤模型;用流式细胞仪从移植瘤内分离出GFP+ EpCAM+细胞(Ki-67+癌上皮细胞)和GFP-/low EpCAM+细胞(Ki-67-/low癌上皮细胞),并采用免疫印迹验证Ki-67的表达;用流式细胞仪检测Ki-67-/low的细胞周期;采用PKH26标记细胞后,根据滞留细胞分析其在体内的增殖能力;采用荧光定量PCR(qPCR)研究Ki-67细胞中CD133、CD44和Lgr5等肿瘤干细胞相关基因的表达水平,并用成球实验研究Ki-67-/low结直肠癌细胞的自我更新能力.结果 从新鲜人结直肠癌移植瘤中分离出GFP+ EpCAM+细胞和GFP-/lowEpCAM+细胞,Western blot检测显示GFP+ EpCAM+细胞高表达Ki-67,GFP-/lowEpCAM+细胞不表达Ki-67;细胞周期检测显示,(82.25±3.16)％的Ki-67-/low细胞在G0/G1期,(51.67±4.11)％的Ki-67+细胞在G0/G1期,体内PKH26标记滞留实验显示Ki-67-/low和Ki-67+细胞分别含(81.53±5.85)％和(4.57±1.05)％ PKH26阳性细胞,差异有统计学意义(P＜0.01),提示Ki-67-/1ow细

作者：颜畅；胡艺冰；穆磊；黄开禹；覃吉超

来源：华中科技大学学报（医学版） 2015 年 44卷 2期