目的 构建大鼠paralemmin-3(PALM3)基因重组慢病毒载体,探讨转染大鼠肺泡巨噬细胞系NR8383细胞的最佳感染复数(MOI)值及目的基因PALM3的表达情况.方法 采用聚合酶链反应技术(PCR)扩增鼠PALM3基因片段,并将其克隆到pCV186-Cherry载体上;经PCR及DNA测序鉴定后,将重组质粒pCV186-Cherry-PALM3、辅助包装质粒pHelper 1.0与pHelper 2.0共转染至293T细胞进行重组慢病毒lenti-CV186-Cherry-PALM3的包装,并用荧光标记法行滴度的测定.将不同MOI值(0、1、10、20、50)的lenti-CV186-Cherry-PALM3转染NR8383细胞,依据转染效率得到最佳MOI值,以此MOI值感染NR8383细胞,采用Western blot法检测目的基因的表达情况.结果 通过PCR扩增获得了大小约2246 bp的目的基因片段,并成功连接到pCV186-Cherry重组质粒上.PCR及DNA测序结果证实重组质粒pCV186-cherry-PALM3携带正确的鼠PALM3基因并成功包装重组慢病毒颗粒.重组慢病毒lenti-CV186-Cherry-PALM3的滴度测定为3×108 TU/mL,感染NR8383的最佳MOI为20,慢病毒lenti-CV186-Cherry-PALM3感染后NR8383细胞中PALM3的蛋白表达水平显著上调(P<0.05).结论 本实验成功构建了含大鼠PALM3基因的重组慢病毒载体lenti-CV186-Cherry-PALM3,并能在NR8383细胞中高效表达,为进一步研究PALM3对肺

作者：唐俭；陈旭昕；樊重阳；韩志海

来源：天津医药 2019 年 47卷 7期