[目的]原核表达纯化人锌指蛋白(zinc finger protein 580,ZNF580)并制备抗人ZNF580单克隆抗体.[方法]将构建的重组质粒pET30a-ZNF580转化大肠杆菌BL21(DE3),由异丙基-β-D-半乳糖苷(Isopropyl beta-D-galactosidase,IPTG)诱导表达并纯化目的蛋白.将纯化的蛋白免疫BALB/c小鼠,制备针对ZNF580的特异性单克隆抗体并通过ELISA和Western blotting方法鉴定.[结果]含有该质粒的大肠杆菌BL21(DE3)经ItPTG诱导表达后,产物蛋白分子量约为19 kDa,通过将Sp2/0细胞与免疫鼠的脾细胞融合获得了1株能稳定表达ZNF580抗体的杂交瘤细胞株(H4E4C5),其分泌的单克隆抗体的IgG亚类IgG2b,ELISA检测腹水抗体效价为1∶1.28×105,Western blotting结果显示抗ZNF580单克隆抗体具有良好的特异性.[结论]本实验成功表达并纯化了ZNF580蛋白并制备了抗ZNF580蛋白的单克隆抗体,为进一步研究锌指蛋白ZNF580的功能奠定了基础.
作者：牟心红；温晓昶；李海生；张文成
来源：武警后勤学院学报（医学版） 2017 年 26卷 3期
