[目的]研究副溶血弧菌AphA对vopT的转录调控机制.[方法]提取野生株(WT)和aphA突变株0qphA)的总RNA,采用引物延伸实验研究vopT的转录起始位点,并根据产物的丰度差异判断AphA对其调控关系.分别将WT和△aphA的总RNA逆转录成cDNA,利用实时定量RT-PCR进一步研究AphA对靶基因的调控关系.将vopT的启动子区克隆入pHRP309质粒的p-半乳糖苷酶基因上游,构建LacZ重组质粒,并将该重组质粒转入WT和⊿aphA4中,通过测定并比较两株菌中β-半乳糖苷酶活性的差异来判定AphA对vopT的调控关系.PCR扩增靶基因整个启动子区DNA序列,并纯化His-AphA蛋白,利用凝胶阻滞实验(EMSA)验证His-AphA对靶基因启动子区是否具有直接的结合作用.[结果]vopT只有一个转录起始位点A(-86),且其转录活性受AphA的间接抑制.RT-PCR和EMSA结果显示AphA对vtrA的转录也具有间接的抑制作用.[结论]AphA间接抑制vopT转录,且该间接抑制作用与VtrA无关.
作者：张伟；侯书宁；何婷；徐淼；黄新祥；杨瑞馥；周冬生；张义全
来源：微生物学通报 2015 年 42卷 10期
