目的:研究副溶血弧菌群体感应(quorum sensing，QS)系统核心调控子OpaR对 pilABCD的转录。 方法:提取副溶血弧菌野生株(wild-type，WT)和 opaR突变株(Δ opaR)的总RNA，采用实时定量PCR(quantitative real-time PCR，qPCR)研究OpaR对 pilA( pilABCD首基因)的转录调控；将 pilABCD上游调控区DNA序列克隆入pHRP309质粒的β-半乳糖苷酶基因上游，构建LacZ重组质粒，并将该重组质粒转入WT和Δ opaR中制备LacZ菌株，通过LacZ报告基因融合试验研究OpaR对 pilA的调控以及 pilA的时相表达。提取WT株总RNA，采用引物延伸试验研究 pilABCD的转录起始位点；PCR扩增 pilABCD上游调控区DNA序列，并纯化His-OpaR蛋白，通过凝胶阻滞试验(electrophoretic mobility shift assay，EMSA)研究His-OpaR与靶DNA片段是否有直接的结合作用，并进一步采用DNaseⅠ足迹试验分析其结合位点。 结果:qPCR和LacZ报告基因融合试验显示OpaR对 pilABCD的转录具有激活作用， pilA的表达水平随培养时间的延长而持续升高；引物延伸结果显示 pilABCD只有一个转录起始位点T(-155)；EMSA和DNaseⅠ足迹试验结果显示OpaR对位于 pilA的翻译起

作者：陆仁飞；孙君芳；薛星帆；张苗苗；李雪；吴齐敏；张义全

来源：中华微生物学和免疫学杂志 2021 年 41卷 12期