[背景]β-半乳糖苷酶在食品加工、临床医疗及基因工程等领域有重要的应用价值,开发酶活性高、热稳定性强的β-半乳糖苷酶已成为研究热点.[目的]从西黑冠长臂猿(Nomascus concolor)粪便微生物宏基因组中挖掘新型 β-半乳糖苷酶并进行酶学性质研究.[方法]以西黑冠长臂猿粪便微生物宏基因组DNA为模板扩增β-半乳糖苷酶基因GalNC1-8,构建重组表达质粒pEASY-E2/GalNC1-8,转化至大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)异源表达,研究其酶学性质.[结果]获得GH35家族碱性β-半乳糖苷酶GalNC1-8,其分子量为28.18 kDa,最适温度为50℃,最适pH为8.0.将该酶在30-50℃下处理1 h,剩余酶活仍保持在80％以上;pH 7.0-9.0下处理1h,剩余酶活大于54％.在含乙醇的反应体系中,其酶活性几乎不受影响;β-疏基乙醇、丙三醇、甲醇、Na+、K+和Li+对其酶活性有促进作用.在0.5-3.5 mol/LNaCl下处理1 h后,仍保留50％以上的酶活性.[结论]从粪便微生物宏基因组中克隆得到β-半乳糖苷酶基因GalNC1-8,并在E.coliBL21(DE3)中成功表达.GalNC1-8是已知宏基因组来源蛋白质分子量最小的β-半乳糖苷酶,其pH作用范围较广、温度稳定性和NaCl耐受性较好,具有较好的应用前景.
作者：范琴；曾璐瑶；杨金茹；韩楠玉；杨云娟；黄遵锡；吴倩；许波
来源：微生物学通报 2022 年 49卷 5期
