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目的 探究miR-136-5p通过靶向作用迁移侵袭增强因子(MIEN1),对宫颈癌细胞侵袭和迁移能力的影响及其机制.方法 收集宫颈癌石蜡包埋组织块及癌旁组织20例,RT-PCR检测MIEN1和miR-136-5p基因表达水平并分析MIEN1和miR-136-5p基因表达的相关性.荧光素酶报告基因实验检测miR-136-5p和MIEN1的相互作用.宫颈癌细胞SiHa分为SiHa、miR-136-5p mimic、pC-MIEN1和pC-MIEN1+miR-136-5p组,转染相应的miRNA或载体,划痕法检测细胞迁移,Transwell法检测细胞侵袭,Western blotting检测MIEN1、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-cadherin、Twist、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、蛋白激酶B(AKT)、p-AKT、核因子κB p65(NF-κB p65)蛋白表达水平.结果 与正常组织比较,宫颈癌组织中MIEN1基因表达明显升高(2.27±0.67,P<0.01),miR-136-5p表达明显降低(0.35±0.13,P<0.01),且MIEN1和miR-136-5p表达水平呈负相关(r=-0.771,P<0.01).在荧光素酶报告实验中,与MIEN1 WT+mimic NC组比较,MIEN1 WT+miR-136-5p mimic组荧光素酶活性明显降低(0.34±0.05,P<0.01).在细胞实验中,与SiHa组比较,miR-136-5p mimic组MIEN1(0.22±0.03)、N-cadherin(0.13±0.03)、Twist(0.19±0.03)、MMP-9(0.14±0.03)、NF-κB p65(0.28±0.04)蛋白表达水平及p-AKT/AKT比率(0.

作者:姚慧欣;王钧峰;吴金涛;李会影;孙喆

来源:西安交通大学学报(医学版) 2020 年 41卷 3期

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作者:
姚慧欣;王钧峰;吴金涛;李会影;孙喆
来源:
西安交通大学学报(医学版) 2020 年 41卷 3期
标签:
宫颈癌 miR-136-5p 迁移侵袭增强因子1 迁移 侵袭
目的 探究miR-136-5p通过靶向作用迁移侵袭增强因子(MIEN1),对宫颈癌细胞侵袭和迁移能力的影响及其机制.方法 收集宫颈癌石蜡包埋组织块及癌旁组织20例,RT-PCR检测MIEN1和miR-136-5p基因表达水平并分析MIEN1和miR-136-5p基因表达的相关性.荧光素酶报告基因实验检测miR-136-5p和MIEN1的相互作用.宫颈癌细胞SiHa分为SiHa、miR-136-5p mimic、pC-MIEN1和pC-MIEN1+miR-136-5p组,转染相应的miRNA或载体,划痕法检测细胞迁移,Transwell法检测细胞侵袭,Western blotting检测MIEN1、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-cadherin、Twist、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、蛋白激酶B(AKT)、p-AKT、核因子κB p65(NF-κB p65)蛋白表达水平.结果 与正常组织比较,宫颈癌组织中MIEN1基因表达明显升高(2.27±0.67,P<0.01),miR-136-5p表达明显降低(0.35±0.13,P<0.01),且MIEN1和miR-136-5p表达水平呈负相关(r=-0.771,P<0.01).在荧光素酶报告实验中,与MIEN1 WT+mimic NC组比较,MIEN1 WT+miR-136-5p mimic组荧光素酶活性明显降低(0.34±0.05,P<0.01).在细胞实验中,与SiHa组比较,miR-136-5p mimic组MIEN1(0.22±0.03)、N-cadherin(0.13±0.03)、Twist(0.19±0.03)、MMP-9(0.14±0.03)、NF-κB p65(0.28±0.04)蛋白表达水平及p-AKT/AKT比率(0.