目的:建立一种能稳定表达猪瘟E2蛋白的真核细胞系,并对E2蛋白的生物活性进行分析.方法:从实验感染兔脾组织中提取总RNA,应用RT-PCR得到了CSFV C-株结构蛋白基因E2,并在目的片段的5′端引入Kozak序列(Kozak,1987),定向克隆于逆转录病毒载体pBABE puro.经PCR、酶切和序列分析鉴定,获得阳性重组质粒.将该重组质粒与水疱性口炎病毒载体pVSV-G共转染GP2-293细胞,收获假型病毒,在Polybrene的介导下感染PK15细胞,嘌呤霉素筛选阳性细胞克隆.通过细胞传代并结合PCR、免疫荧光及ELISA方法对表达蛋白的生物活性进行分析.结果:初步检测显示所建立的PK15-E2细胞能稳定携带外源基因进行传代,而且表达的E2蛋白能被CSF阳性血清所识别,并具有良好的生物活性.结论:通过该方法建立的真核表达系统是切实可行的,能为猪瘟的预防和诊断奠定良好的基础.
作者：田宏；刘湘涛；吴锦艳；尚佑军；郑海学；代兴国；孙世琪；谢庆阁
来源：细胞与分子免疫学杂志 2008 年 24卷 7期
