目的:构建人细胞角蛋白8(CK8)全长CDS序列真核表达载体,并转染人肝癌细胞SMMC7721,为研究CK8的生物学功能提供细胞模型.方法:RT-PCR扩增CK8全长CDS,克隆入pMD18-T simple vector质粒,鉴定正确后,亚克隆入质粒pEGFP-C1,构建真核表达载体pEGFP-CK8.脂质体介导转染SMMC7721细胞,荧光显微镜、real time PCR和Western blot检测CK8的表达.生物信息学软件分析CK8理化特性、信号肽及功能位点等.结果:PCR、酶切和测序结果均证实重组质粒含有人CK8全长CDS序列,转染实验表明CK8在SMMC7721细胞中发生了高表达.结论:成功地构建了人CK8全长CDS真核表达载体,并使其在SMMC7721细胞中获得高表达,为研究CK8的生物学功能奠定了实验基础.
作者：寻萌；赵四海；曹春霞；薛欣；邵明明；李薇；徐琨；楚雍烈
来源：细胞与分子免疫学杂志 2011 年 27卷 2期
