目的 构建靶向HIF-1α的RNAi慢病毒载体,为进一步观察其对难治性癫痫大鼠模型脑内HIF-1a基因过度表达的干扰作用奠定基础.方法 根据GenBank报道的大鼠HIF-1α基因序列,选择4个靶序列,设计并合成4对含编码短发夹RNA(shRNA)序列的寡核苷酸,双链退火后,插入经限制性内切酶Age I和EcoR I处理所得的线性化慢病毒载体pGCSIL-GFP(表达绿色荧光蛋白,GFP)的U6启动子下游,合成4种重组病毒pGCSIL-GFP-shRNA1,2,3,4,经酶切和测序鉴定构建正确后,分别与Lipofectamine 2000共转染293T细胞包装,收集富含慢病毒颗粒的细胞上清液浓缩后得到高滴度的慢病毒液,孔稀释法测定病毒滴度.采用同样方法构建阴性对照重组慢病毒.结果 酶切和测序分析证实成功构建了靶向大鼠HIF-1α的慢病毒表达载体4对,滴度为(5～7)×108 TU/ml.结论 本实验成功构建了针对大鼠HIF- 1α基因的RNAi慢病毒载体,为实现在细胞和动物模型以慢病毒为载体的HIF-1a靶向治疗提供了良好的实验基础.
作者：陈蕾；曾天芳；周东；李耀华
来源：西部医学 2012 年 24卷 6期
