目的 观察体外分离培养的人退行性变髓核细胞形态学表现,并分析其生物学特性.方法 收集人退变髓核组织,胰酶联合Ⅱ型胶原酶消化分离出髓核细胞行平面培养并传代,倒置显微镜观察细胞形态及生长情况,并分别在1w、2w、3w三个时间点通过硫酸化的糖胺聚糖含量测定、免疫组化染色、Safranin-O染色、Real-time PCR对髓核细胞进行生物学特性分析及鉴定.结果 髓核细胞呈星形、多角形、梭形,部分胞浆突起,伸出伪足,与软骨样细胞形态相近,传代后细胞形态体积较原代大.髓核细胞能合成大量硫酸化的糖胺聚糖,细胞中富含蛋白多糖、Ⅱ型胶原,免疫染色呈阳性,随着培养周数的增加,其着色深度无明显强化.Safranin-O染色将细胞核染成红色,胞浆淡染,随着培养日期的延长,其红色强度无明显加深.Real-time PCR检测到Aggrecan、CollagenⅡ两基因在1w、2w、3w均持续稳定的表达,各观察点间无统计学差异(P＞0.05).结论 胰酶联合Ⅱ型胶原酶消化法操作简单,培养效率高,传代培养的髓核细胞增殖速度快,经鉴定具有典型的类软骨细胞表征及良好的生物学特性,能持续稳定的表达蛋白多糖及Ⅱ型胶原.
作者：罗栩伟；李艳；刘康；冯刚；陈竹
来源：西部医学 2016 年 28卷 8期
