目的 探讨适用于小鼠肾小管上皮细胞(mRTECs)分离培养及鉴定的技术方法.方法 采用机械研磨肾脏组织分离肾小管节段并结合Ⅱ型胶原酶消化分离培养法进行mRTECs原代培养,利用倒置显微镜观察细胞生长情况；锥虫蓝法、绘制生长曲线法、3-(4,5-二甲基-2-噻唑)-2,5-二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)法、DNA周期检测法分别测定和观察mRTECs传代成活率、生长情况及增殖特征；免疫荧光染色法鉴定细胞.结果 获得的细胞3d后从贴壁的肾小管节段边缘长出,7d后呈铺路石样,生长迅速可传代；传代细胞成活率达96％以上；第1代(P1)、第3代(P3)细胞生长曲线近似“S”形,MTT法显示P1、P3细胞生长至第3～5天光密度值变化较明显；随传代次数的增加,第5代细胞生长曲线近似平缓,光密度值无明显变化,细胞逐渐衰老；P1细胞G0/G1和(S +G2)/M分别为78.9％和21.1％,P3细胞G0/G1和(S+ G2)/M分别为82.1％和17.9％；P3细胞行免疫荧光染色细胞角质蛋白-18及上皮型钙黏素显示细胞质内蛋白表达阳性,细胞阳性率均达98％.结论 机械研磨并结合Ⅱ型胶原酶消化培养法能成功培养mRTECs,建立稳定、高效的细胞分离和培养技术方法,为肾脏疾病与心血管功能相关性研究提供理想的细胞来源.
作者：白蓉；唐辛；徐进；许秀芳；李温斌
来源：新乡医学院学报 2013 年 30卷 8期
