目的：细胞转分化（ EMT）过程中的关键事件包括上皮细胞蛋白（ E-钙黏蛋白）的表达下调，细胞活动性增加，细胞基质生成的增多等。文中构建鼠原代肾小管上皮细胞培养及鉴定的方法，探究C3aR活化是否能够引起小管上皮细胞发生上皮-间质细胞转分化。方法用鼠肾小管节段进行肾小管上皮细胞原代培养，以免疫细胞化学及免疫荧光染色对上皮细胞进行鉴定。实验分为正常对照组，C3aR激动剂设5个浓度组：0．1、1、100、500及2000 ng／mL组，另设3个时间组：6、12及24 h组。利用Real-time PCR检测肾小管上皮细胞中E-钙黏蛋白、α-SMA及collagen I的表达水平变化；利用Western blot检测E-钙黏蛋白、α-SMA蛋白表达水平；用鬼笔环肽对上皮细胞行骨架染色，观察细胞骨架形态变化。结果与正常对照组比较，C3aR激动剂组（500 ng／mL、刺激48 h）抑制E-钙黏蛋白表达[（0．950±0．901） vs （0．650±0．221），P＜0．05]，上调α-SMA [（1．380±0．062） vs （1．600±0．103）， P＜0．05]和collagen I表达（P＜0．05），且各自表达趋势与C3aR激动剂呈时间和剂量依赖关系。细胞骨架染色结果显示，随着C3aR激动剂刺激时间的延长，上皮细胞内由激动蛋白构成的应力纤维生成逐渐增多。结论成功构建了小鼠肾小管上皮细胞原
作者：张志诚；赵文紧；郑敬民
来源：医学研究生学报 2017 年 30卷 1期
