目的 探讨人结肠癌相关成纤维细胞(CAFs)及结肠正常成纤维细胞(NFs)的培养和鉴定方法,分析两者在生物学特性和蛋白表达方面的差异.方法 采用组织块法和胶原酶消化法进行人结肠CAFs和NFs的原代培养；选择第3代人结肠CAFs及NFs,通过形态学观察和免疫细胞化学染色进行鉴定；细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测人结肠CAFs和NFs的增殖活性,并绘制7d生长曲线；酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定结肠CAFs和NFs细胞上清液中骨桥蛋白(OPN)、转化生长因子-β(TGF-β)、血管内皮生长因子(VEGF)及基质金属蛋白酶(MMP)-2含量.结果 结肠CAFs胞质突减少,细胞不规则,排列紊乱,可见双核及多核细胞,除细胞角蛋白(CK)外,波形蛋白(vimentin)与α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)均为阳性表达；与结肠NFs比较,结肠CAFs增殖活性明显增强；ELISA法测定结肠CAFs和NFs细胞上清液中蛋白含量,其中OPN分别为(2.106±0.137) μg/L和(1.499±0.151) μg/L(P ＜0.01),TGF-β分别为(331.203±12.203) ng/L和(315.391±12.998) ng/L(P＜0.01),VEGF分别为(17.216±0.632) ng/L和(14.887 ±0.661) ng/L(P＜0.01),MMP-2分别为(1.830±0.192) μg/L和(1.436±0.102) μg/L(P ＜0.01).结论 通过组织块法和胶原酶消化法原代培养皆可获得高纯度的人结肠CAFs和NFs；两

作者：乌新林；林凯金；苏秀兰；侯明星；董培德；施琳

来源：中华实验外科杂志 2012 年 29卷 11期