目的:建立一种人表皮干细胞的无血清培养方法,并与目前表皮干细胞常用的有血清培养方法进行比较,探讨该条件是否更适合表皮干细胞的生长和有利于实施表皮干细胞的调控,提高实验的准确性.方法:实验于2002-05/2004-07在江西医学院第二附属医院医学分子中心完成.①从幼儿包皮中分离表皮细胞、用胶原Ⅳ分别黏附表皮细胞10～15 min,收集黏附细胞,即为纯化的表皮干细胞.②分3组进行培养,3组培养条件均有无钙低糖Dulbeceo改良的Eagle培养基,0.05 mmol/L CaCl2,10μg/L表皮细胞生长因子,1×10-6mol/L氢化可的松;有血清培养组还含有100 g/L螯合钙的干细胞专用血清;无血清培养组1还含有100 g/L无血清培养基血清替代物.无血清培养组2还含有100 g/L无血清培养基血清替代物和50 μg/L牛垂体提取物.③培养20 d后,在倒置显微镜下对所培养细胞进行形态学观察;同时计数细胞数(大于100个细胞团为1个集落称克隆),计数各组克隆数;采用胰酶消化传代,计数传代数及多次传代后所得细胞总数;流式细胞术分析α6,CD71(人表皮干细胞表面标记)的表达情况,计算人表皮干细胞α6bri CD71dim细胞百分率;采用流式细胞术进行细胞周期分析处于静止期/DNA合成前期人表皮干细胞百分率,采用免疫组化法鉴定细胞角蛋白19及5/8(均表明人表皮干细胞生
作者：李剑；李洁；戴育成
来源：中国临床康复 2005 年 9卷 22期
