背景:作为信号传导通路中的第二信使,活性氧(主要指超氧离子和过氧化氢)对细胞的生长、分化起重要作用.过量的活性氧在心脏疾病中启动了心肌细胞的凋亡,尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4源性活性氧的过量产生诱导凋亡是否抑制了胚胎干细胞向心肌细胞的分化.目的:探讨尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4活性氧对心肌细胞分化的抑制作用.设计:随机对照实验观察.单位:卫生部北京医院老年医学研究所.材料:胚胎干细胞CGR8为本实验室自存,其他主要试剂除特别注明均购自Sigma公司.方法:实验于2003-10/2005-08在卫生部北京医院老年医学研究所进行.①将小鼠胚胎干细胞分化成胚小体.在分化4d后以不同浓度的过氧化氢(1,10,100,1 000 nmol/L)处理胚小体1 h,在分化8 d后观察心肌细胞的生成,分析活性氧对心肌细胞分化的影响.②将pcDNA3.1和pcDNA3.1-NOX4质粒分别转染CGR8细胞,同时以未进行转染的CGR8细胞为对照,以RT-PCR和Western Blotting测定尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4 mRNA和MLC2v蛋白水平,应用定量四唑氮蓝高水平表达尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4干细胞中活性氧水平.③采用活性氧清除剂N-乙酰半胱氨酸(5 mmol/L)和过氧化氢酶(200 U/mL)转染前处理2 h作为对照,用Hoechst染色、TUNEL积DNA ladder分析
作者：张小勇；国汉邦；黎健
来源：中国组织工程研究与临床康复 2007 年 11卷 7期
