背景:内皮型一氧化氮合酶表达产物对内皮细胞的影响是血管外科基础研究中的重要课题,对于生物人工血管的研制有重要意义.目的:构建内皮犁一氧化氮合酶基因真核表达载体pcDNA3.1/eNOS,以脂质体为介导观察其在血管内皮细胞中的转染效率,评价表达产物内皮型一氧化氮合酶的酶学活性及其对内皮细胞生长的影响.设计、时间及地点:单一样奉观察,实验于2005-07/2007-05在南京人学医学院附属鼓楼医院生物化学实验室完成.材料:质粒PCMV-eNOS由勋阳医学院张群林教授惠赠.pcDNA3.1真核表达载体由南京大学博上后贾立军馈赠,pcDNA3.0/EGFP质粒由戚金亮博士提供.大肠杆菌DH5a和人脐静脉内皮细胞株(ECV304)为南京大学生物系保存.方法:采用分子生物学技术.先用限制性核酸内切酶Ecor I酶切质粒PCMV/eNOS.电泳回收3.6 kb编码人内皮型一氧化氮合酶cDNA序列,克隆入质粒pcDNA3.1的Ecor I酶切位点,通过内皮型一氧化氮合酶cDNA序列中的Xho I酶切何点筛选其插入载体的方向,构建pcDNA3.1/eNOS重组质粒.以Lipofec-tamine为介导将其与pcDNA3.0/EGFP共转染分离培养的人脐静脉内皮细胞(ECV304).主要观察指标:①观察转染后对ECV304生长的影响.在流式细胞仪和荧光显微镜下计算转染效率.②以反转录-聚合酶链反应和免疫组织化学榆测内皮型一
作者：乔彤；刘长建；冉峰；周敏；乔威；张乐；李雷
来源：中国组织工程研究与临床康复 2008 年 12卷 46期
