背景:解旋酶-引发酶复合体是Ⅱ型单纯疱疹病毒进行复制的必需基因,UL5基因为Ⅱ型单纯疱疹病毒解旋酶-引发酶复合体的组成单位之一.目的:应用RNA干扰技术分析特异性小干扰RNA对Ⅱ型单纯疱疹病毒UL5基因的干扰作用.方法:以Ⅱ型单纯疱疹病毒UL5基因为靶目标,设计、合成5对特异性小干扰RNA.通过LipofeCtamine 2000脂质体将特异性小干扰RNA转染HEK293细胞.48 h后行荧光定量RT-PCR检测UL5基因转录水平,终点滴定法测定干扰后病毒滴度,观察其干扰效果.结果与结论:小干扰RNA成功转染入细胞内.荧光定量RT-PCR结果显示,siRNA 722、siRNA 2394、siRNA 2513和siRNA 2627均可不同程度降低靶mRNA表达,病毒滴度检测结果显示siRNA 722、siRNA 2394、siRNA 2513和siRNA 2627均可不同程度降低上清液中病毒感染滴度,阴性对照组和siRNA 374对病毒感染滴度无影响.针对UL5基因的有效小干扰RNA可以特异性降低Ⅱ型单纯疱疹病毒的复制水平.
作者：潘晓瑜；吕延成；王志勇；樊俊；周丹丹；袁俊杰
来源：中国组织工程研究 2012 年 37期
