背景：脊髓损伤后只有尽早地在损伤局部构建有效的血管网络，才能为各种细胞的分化提供营养支持和代谢保证，加速损伤局部的愈合。<br> 目的：构建三点突变的低氧诱导因子1α重组腺病毒表达载体，将其转染大鼠骨髓间充质干细胞后检测常氧条件下对脊髓损伤促血管新生的作用。<br> 方法：利用PCR方法定点突变人低氧诱导因子1α编码区的第402，564和803位氨基酸，将突变后低氧诱导因子1α基因重组入腺病毒pAdEasy-1系统，包装病毒并测定滴度，同理包装未突变组和空病毒组；以3种病毒液连同空白组共分4组进行后续实验。将病毒液转染入大鼠骨髓间充质干细胞内，通过示踪因子增强型绿色荧光蛋白观察病毒转染效率，通过RT-PCR方法检测4组细胞中低氧诱导因子1α基因mRNA表达情况；进一步通过Western blot方法检测4组细胞中低氧诱导因子1α基因及其下游成血管基因血管内皮细胞生长因子的蛋白表达情况。<br> 结果与结论：编码区第402，564和803位氨基酸均定点突变为丙氨酸；3种腺病毒重组体构建成功并包装鉴定完毕。含突变基因病毒液组、含未突变基因病毒液组低氧诱导因子1α mRNA表达量明显高于空病毒液组、空白组(P <0.05)。含突变基因病毒液组细胞低氧诱导因子1α蛋白及血管内皮细胞生长因子蛋白表达量
作者：惠春影；肖洪艳；何欣玲；王维
来源：中国组织工程研究 2014 年 19期
