背景：脑源性神经生长因子对多巴胺能神经元、胆碱能神经元等多种神经元都有广泛作用，能促进干细胞更多的向神经元样细胞分化；低氧诱导因子1α可提高组织和细胞在缺血环境下的生存能力，维持局部成血管微环境方面比任何基因均有更广泛的生理作用。目的：通过构建脑源性神经生长因子联合三点突变型低氧诱导因子1α双基因重组腺病毒载体，探索其转染大鼠骨髓间充质干细胞后2种基因在体外常氧条件下对脊髓损伤促神经再生及血管新生的作用。方法：①利用PCR方法定点突变人低氧诱导因子1α编码区的第402、564和803位氨基酸，将突变后低氧诱导因子1α基因联合脑源性神经生长因子重组入腺病毒pAdEasy-1系统，包装病毒并测定滴度。②以4种病毒液连同空白组共分5组进行后续实验；将病毒液转染入骨髓间充质干细胞内观察转染效率，检测各组转染细胞中脑源性神经生长因子基因及低氧诱导因子1α mRNA和蛋白表达情况。③进一步通过Western blot方法检测各组细胞中低氧诱导因子1α的下游成血管基因血管内皮生长因子蛋白表达情况。结果与结论：①编码区第402、564和803位氨基酸均定点突变为丙氨酸；4种腺病毒重组体构建成功并包装鉴定完毕。②实验组、阳性对照组1脑源性神经生长因子 mRNA及蛋白表达量明显高于其他组(P<
作者：徐艳梅；孙飞；惠春影；王维
来源：中国组织工程研究 2014 年 23期
