目的运用限制性酶切片段差异显示(RFDD-PCR)技术初步筛选支气管哮喘肾虚证的相关基因,以冀探讨构建中医证的相关基因表达谱的一种研究方法.方法应用RFDD-PCR技术,收集支气管哮喘肾虚证患者治疗前后外周血,分离其总RNA,进行DNase I处理、合成双链cDNA、TaqI限切酶酶切、在其两端连上接头、特异配对于接头的引物来降落PCR扩增、变性聚丙烯酰胺凝胶电泳、AgNO3染色、回收差异条带并重新PCR扩增、反向斑点杂交、测序、生物信息学分析.结果共找到36条差异条带,其中25条能用斑点杂交验证,选取3条测序,结果与基因库比较未发现同源序列.结论 3条基因片段可能是与支气管哮喘肾虚证相关的新基因;RFDD-PCR技术不失为构建中医证的相关基因表达谱的一种好方法.
作者：胡岳山；李杰芬；王剑；高丽；谭宇蕙
来源：现代中西医结合杂志 2004 年 13卷 8期
