目的 探讨高浓度葡萄糖对人结肠癌上皮细胞Caco-2细胞胆固醇吸收的影响,探索其作用机制.方法 采用实验研究方法.(1) CCK-8检测细胞增殖:采用CCK-8检测不同浓度(12.5、100.0、300.0、700.0、1 000.0、1 388.0 mmol/L)葡萄糖溶液作用于Caco-2细胞时,Caco-2细胞增殖率变化情况,确定葡萄糖溶液对Caco-2细胞半数抑制浓度,结合文献确定后续实验中葡萄糖溶液浓度梯度.(2)检测Caco-2细胞胆固醇吸收量:将Caco-2细胞分为胆固醇组、胆固醇+依折麦布(胆固醇抑制剂)组和空白对照组.胆固醇组:加入100 μmol/L胆固醇溶液和不同浓度(5.0、25.0、50.0 mmol/L)葡萄糖溶液.胆固醇±依折麦布组:加入100 μmol/L依折麦布、100μmol/L胆固醇溶液和不同浓度(5.0、25.0、50.0 mmol/L)葡萄糖溶液.空白对照组:加入DMEM培养基和对应浓度DMSO.检测Caco-2细胞胆固醇吸收量.(3)Western blot检测三磷酸腺苷结合盒G8(ABCG8)、三磷酸腺苷结合盒G5(ABCG5)、尼克曼蛋白(NPC1L1)、B族Ⅰ型清道夫受体(SR-B Ⅰ)蛋白表达:将Caco-2细胞分为葡萄糖组、葡萄糖±依折麦布组和对照组.葡萄糖组:加入不同浓度(5.0、25.0、50.0 mmol/L)葡萄糖溶液.葡萄糖±依折麦布组:加入不同浓度(5.0、25.0、50.0mmol/L)葡萄糖溶液和100 μmol/L依折麦布.对照组加入100
作者:张栋;喻超;赵小毅;宋健;周海燕;罗玉梅;孙诚谊
来源:中华消化外科杂志 2016 年 15卷 6期