目的 观察并验证人主动脉平滑肌细胞(HASMC)Notch2蛋白表达的变化对其细胞钙化的影响,并探讨其机制.方法 体外培养HASMC,将其分为两组,分别为正常对照组与诱导钙化组.前者常规培养,后者在常规培养的基础上加用钙化诱导剂β-甘油磷酸(5 mmol/L)、抗坏血酸(50μg/mL)和地塞米松(100 nmol/L),两组细胞均培养7 d.另取上述方法诱导钙化的HASMC为钙化对照组,再设钙化抑制组,即在钙化对照组的基础上加入Notch特异性抑制剂γ-内分泌酶抑制剂(50μmol/L),两组细胞均培养7 d.四组均用白介素-6诱导细胞的炎症反应.采用免疫印迹法检测各组细胞内Notch2、磷酸化核转录因子STAT3(p-STAT3)和骨形态发生蛋白4(BMP-4)的蛋白表达水平;酶联免疫法测定各组细胞培养上清液中BMP-4蛋白的含量;逆转录-聚合酶链反应检测诱导钙化组和正常对照组中HASMC Notch2 mRNA的表达;免疫荧光染色法观察钙化对照组与钙化抑制组中HASMC BMP-4蛋白的表达.结果(1)诱导钙化组中HASMC Notch2、p-STAT3和BMP-4蛋白表达水平明显高于正常对照组(P<0.05);诱导钙化组的培养液上清中BMP-4蛋白含量为(66.42±2.89)pg/mL,明显高于正常对照组的(22.35±2.68)pg/mL(P<0.05);诱导钙化组中HASMC Notch2 mRNA的表达明显高于正常对照组(P<0.05).(2)钙化抑制组中HA
作者:顾秀莲;敬梅;樊济海;巢胜吾;李博;王玲;凌秋洋
来源:心血管病学进展 2020 年 41卷 9期