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目的 在大肠杆菌中表达重组人白血病抑制因子(HLIF)蛋白,并探索其高效表达的条件.方法 将HLIF重组质粒转化至大肠杆菌BL21,分别给予不同诱导时间(4、8、12、16、20、24 h)、不同浓度大肠杆菌(吸光度值分别为0.5、0.6、0.8、1.0)、不同诱导温度(20、25、30、37、42℃)、不同浓度诱导剂异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)(0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mmol·L-1)、不同浓度乙酸(0.0、0.1、0.2、0.3、0.4 mmol·L-)进行培养,蛋白电泳考马斯亮蓝染色后,采用Image J软件分析HLIF蛋白的相对表达量,观察不同干预条件对HLIF表达的影响.结果 不同诱导时间下HLIF蛋白相对表达量比较差异有统计学意义(F=22.088,P<0.05),诱导16 h时的HLIF蛋白相对表达量显著高于诱导4、8、12、20、24 h(P <0.05).不同浓度(以吸光度值表示)大肠杆菌诱导时HLIF蛋白相对表达量比较差异有统计学意义(F=17.153,P<0.05);吸光度值为0.8时HLIF蛋白相对表达量显著高于吸光度值为0.5、0.6时(P<0.05),吸光度值为1.0时与吸光度值为0.8时HLIF蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05).不同温度诱导时HLIF蛋白相对表达量比较差异有统计学意义(F=18.053,P<0.05),25℃时HLIF蛋白相对表达量显著高于20、30、37、42℃时(P<0.05).不同浓度诱导剂诱导

作者:曹顺;杨玉露;徐光华;陈思佳;王天云

来源:新乡医学院学报 2019 年 36卷 3期

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作者:
曹顺;杨玉露;徐光华;陈思佳;王天云
来源:
新乡医学院学报 2019 年 36卷 3期
标签:
人白血病抑制因子 原核表达 优化
目的 在大肠杆菌中表达重组人白血病抑制因子(HLIF)蛋白,并探索其高效表达的条件.方法 将HLIF重组质粒转化至大肠杆菌BL21,分别给予不同诱导时间(4、8、12、16、20、24 h)、不同浓度大肠杆菌(吸光度值分别为0.5、0.6、0.8、1.0)、不同诱导温度(20、25、30、37、42℃)、不同浓度诱导剂异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)(0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mmol·L-1)、不同浓度乙酸(0.0、0.1、0.2、0.3、0.4 mmol·L-)进行培养,蛋白电泳考马斯亮蓝染色后,采用Image J软件分析HLIF蛋白的相对表达量,观察不同干预条件对HLIF表达的影响.结果 不同诱导时间下HLIF蛋白相对表达量比较差异有统计学意义(F=22.088,P<0.05),诱导16 h时的HLIF蛋白相对表达量显著高于诱导4、8、12、20、24 h(P <0.05).不同浓度(以吸光度值表示)大肠杆菌诱导时HLIF蛋白相对表达量比较差异有统计学意义(F=17.153,P<0.05);吸光度值为0.8时HLIF蛋白相对表达量显著高于吸光度值为0.5、0.6时(P<0.05),吸光度值为1.0时与吸光度值为0.8时HLIF蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05).不同温度诱导时HLIF蛋白相对表达量比较差异有统计学意义(F=18.053,P<0.05),25℃时HLIF蛋白相对表达量显著高于20、30、37、42℃时(P<0.05).不同浓度诱导剂诱导