目的 构建靶向表皮生长因子受体(EGFR)的短发卡状RNA(shRNA)质粒表达载体并进行鉴定.方法 ①根据人类EGFR的mRNA序列,设计4条干扰片段,以PGPU6/GFP/Neo质粒为载体,构建shRNA重组体,转化入DH5a大肠杆菌,提取质粒,进行酶切和测序鉴定;②采用脂质体Lipofectamin 2000分别转染人皮肤鳞状细胞癌细胞株Colo-16细胞,用G418筛选阳性克隆.结果 ①经酶切及测序鉴定,成功构建了针对 EGFR的4个重组干扰质粒;②成功转染Colo-16细胞,经筛选后得到稳定表达的细胞克隆.结论 利用 RNAi技术原理成功构建针对 EGFR的shRNA重组质粒,并转染入Colo-16细胞.
作者：王慧；魏志平；刘彦群
来源：徐州医学院学报 2010 年 30卷 5期
