目的:构建血管内皮细胞生长因子(VEGF165)真核表达质粒pcDNA3.1(-)/h VEGF165,并通过转染心肌细胞来验证其生物活性. 方法:应用DNA重组方法,将编码h VEGF165全长cDNA克隆于真核表达载体pcDNA3.1(-)中,构建pcDNA3.1(-)/h VEGF165真核表达质粒;应用阳性脂质体介导的基因转染技术,将真核表达质粒pcDNA3.1(-)/h VEGF165瞬时转染培养的大鼠心肌细胞中;采用RT-PCR,ELISA,Western blot及免疫组化染色等方法检测VEGF165基因在心肌细胞中的表达情况;应用MTT法检测转染后细胞上清液中VEGF165的生物活性. 结果:将构建好的真核表达质粒pcDNA3.1(-)/h VEGF165转染心肌细胞后,VEGF mRNA及蛋白表达水平明显增高,转染后的心肌细胞培养上清液具有促使内皮细胞增殖的生物活性. 结论:成功构建了真核表达质粒pcDNA3.1(-)/h VEGF165,其转染心肌细胞后可获得较高水平VEGF蛋白的表达,所表达出VEGF蛋白具有生物学活性.
作者：易甫；吕安林；贾国良；张荣庆
来源：心脏杂志 2003 年 15卷 3期
