为了探讨绿色荧光蛋白标记的红色酵母D-氨基酸氧化酶(DAAO)基因在人宫颈癌细胞(HeLa细胞)中的表达及其功能,采用基因重组技术构建了含有CMV启动子和EGFP、DAAO基因开放阅读框(ORF)的真核表达载体pIRES-DAAO.脂质体法转染HeLa细胞,荧光显微镜下观察转染细胞中绿色荧光蛋白的表达,流式细胞术分析转染效率并筛选荧光阳性细胞,命名为HeLa-D.以不同浓度的前药D-Ala处理HeLa-D细胞,MTT法检测细胞存活率.结果显示,荧光显微镜下可见绿色荧光蛋白在HeLa-D细胞中表达,流式细胞术成功筛选出HeLa-D细胞.前药D-Ala能明显杀伤HeLa-D细胞.结果表明,EGFP可作为报告基因快速筛选DAAO表达载体转染的细胞,DAAO/D-Ala自杀基因系统可进一步用于肿瘤的基因治疗研究.
作者：何志颖；江千里；陈元晓；温丽敏；姚玉成；王新民；李文林；王健民；胡以平
来源：遗传学报 2004 年 31卷 11期
