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目的 观察贝伐单抗对人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞抗氧化功能的影响,以探讨抗新生血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)制剂治疗年龄相关性黄斑变性后黄斑部萎缩的可能机制.方法 用含终浓度0.25g·L-1贝伐单抗的DMED/F12培养液培养人RPE细胞系ARPE-19细胞,根据处理时间的不同分为Oh组(对照组)、12 h组、24 h组、48 h组、72 h组共5组,加入H2O2诱导氧化应激反应.用CCK-8法检测细胞活性,MitoSox Red荧光染色检测细胞内线粒体活性氧(reactive oxygen species,ROS)产生水平,JC-1荧光染色检测细胞线粒体膜电位的变化;分别用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫蛋白印迹法(Western blot)检测各组促氧化因子NADPH氧化酶4(NADPH oxidase 4,NOX4)和抗氧化因子血红素氧合酶-1(heme oxygenase 1,HO-1) mRNA和蛋白的表达水平.结果 CCK-8检测结果显示:上述处理对细胞活性无显著影响,Oh组、12 h组、24h组、48h组和72 h组细胞活性分别为(100.2±3.3)%、(99.2±2.7)%、(102.5±6.4)%、(103.9±3.7)%和(103.6±3.3)%,差异无统计学意义(P>0.05);与对照组相比,12 h、24h、48 h、72 h组细胞内ROS水平上升,差异有统计学意义(P<0.05);线粒体膜电位在12 h、24h、48 h、72 h

作者:张照华;杨玲玲;张盼盼;董琪;徐海峰

来源:眼科新进展 2017 年 37卷 4期

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作者:
张照华;杨玲玲;张盼盼;董琪;徐海峰
来源:
眼科新进展 2017 年 37卷 4期
标签:
年龄相关性黄斑变性 贝伐单抗 活性氧 人视网膜色素上皮细胞 age-related macular degeneration bevacizumab reactive oxygen species human retinal pigment epithelial cells
目的 观察贝伐单抗对人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞抗氧化功能的影响,以探讨抗新生血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)制剂治疗年龄相关性黄斑变性后黄斑部萎缩的可能机制.方法 用含终浓度0.25g·L-1贝伐单抗的DMED/F12培养液培养人RPE细胞系ARPE-19细胞,根据处理时间的不同分为Oh组(对照组)、12 h组、24 h组、48 h组、72 h组共5组,加入H2O2诱导氧化应激反应.用CCK-8法检测细胞活性,MitoSox Red荧光染色检测细胞内线粒体活性氧(reactive oxygen species,ROS)产生水平,JC-1荧光染色检测细胞线粒体膜电位的变化;分别用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫蛋白印迹法(Western blot)检测各组促氧化因子NADPH氧化酶4(NADPH oxidase 4,NOX4)和抗氧化因子血红素氧合酶-1(heme oxygenase 1,HO-1) mRNA和蛋白的表达水平.结果 CCK-8检测结果显示:上述处理对细胞活性无显著影响,Oh组、12 h组、24h组、48h组和72 h组细胞活性分别为(100.2±3.3)%、(99.2±2.7)%、(102.5±6.4)%、(103.9±3.7)%和(103.6±3.3)%,差异无统计学意义(P>0.05);与对照组相比,12 h、24h、48 h、72 h组细胞内ROS水平上升,差异有统计学意义(P<0.05);线粒体膜电位在12 h、24h、48 h、72 h