目的 利用定量蛋白组学技术探索高糖状态下人视网膜微血管周细胞(HRMPCs)的蛋白表达变化,为糖尿病视网膜病变(DR)早期周细胞缺失的机制研究提供新的蛋白靶点.方法 将HRMPCs分为对照组和高糖组,分别用葡萄糖浓度为25 mmol/L和35 mmol/L的DMEM培养基培养48 h,细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法测定各组HRMPCs活性.提取各组细胞的蛋白并进行酶切,得到肽段,取2μg肽段进行飞行时间质谱(TOF-MS)检测,质谱的采集模式为数据依赖性(DDA),对得到的蛋白表达信息进行生物信息学分析.结果 高糖组的HRMPCs数量较对照组明显减少,且高糖组的部分细胞出现体积变小、变形等改变.CCK-8实验结果显示,高糖组HRMPCs吸光度(A450)值为0.75±0.04,明显低于对照组的0.91±0.05,差异有统计学意义(t=5.784,P=0.0002).本研究共鉴定到1972个可定量蛋白,其中差异蛋白有54个(差异倍数>1.5).相比于对照组,高糖组细胞中上调的差异蛋白有13个,包括CTNNB1、CTBP2等,下调的差异蛋白有41个,包括SQSTM1、HMGCS1等.这些差异蛋白主要参与了三羧酸循环、有氧呼吸等生物学过程.结论 高糖刺激HRMPCs会改变多种蛋白的表达,进而影响细胞的呼吸作用和ATP的生成,最终导致周细胞的缺失.
作者：肖梦然；张晓敏；邵先锋；肖静；杨付花；张慧；VickiL.Ea；李筱荣
来源：中华实验眼科杂志 2019 年 37卷 9期
