目的:构建能同时表达丙型肝炎病毒核心区与IgG Fc段的融合基因真核表达载体pcDNA3 HCV C-Fc,为下一步修饰和转染树突状细胞,制备能高效表达HCV C和Fc基因的树突状细胞疫苗做准备. 方法:用分别含有Xhol Ⅰ和XbaⅠ双酶切位点的人免疫球蛋白(IgG)Fc区基因上、下游引物,以含有人IgG基因序列的质粒pCMVsFc为模板,通过PCR扩增获得Fc区基因片段,基因片段回收后,以Xhol Ⅰ和XbaⅠ双酶切,定向插入到含HCV C基因的质粒PcDNA3 HCV C下游双粘端位点之间,获得重组表达质粒pcDNA3 HCVFc.通过酶切、PCR及插入片段序列测定对质粒进行鉴定.以抗HCV C和抗Fc单克隆抗体为一抗,利用间接免疫荧光法检测pcDNA3 HCV-Fc在人肝癌细胞7721中的瞬时表达. 结果:酶切、PCR及测定鉴定证实,pcDNA3 HCV-Fc插入片段为Fc区基因片段,免疫荧光法检测表明其可以在7721细胞中瞬时表达. 结论:构建的质粒pcDNA3 HCV-Fc可以在7721细胞中瞬时表达Fc基因,为研究HCV C-Fc融合基因修饰的树突状细胞的功能奠定了基础.
作者：王全楚；冯志华；周永兴；聂青和
来源：医学研究生学报 2003 年 16卷 3期
