目的:构建丙型肝炎病毒(HCV)多表位基因的真核表达载体,获得重组质粒稳定转染的P815细胞克隆. 方法:PCR方法扩增核心区羧基端部分缺失的基因片段Ct;合成HCV E2区模拟表位和NS3～NS5七个T细胞表位基因Em;分别克隆入穿梭质粒载体pDE22中. 用BamHⅠ/HindⅢ双酶切pDE22得到复合多表位基因CtEm,再将CtEm亚克隆入真核表达载体pCDNA3.1(-),构建重组质粒pCDNA3.1(-)-CtEm,经酶切鉴定及测序正确后,通过脂质体转染至P815细胞,持续G418压力选择和有限稀释法克隆化获得稳定转染的细胞系,用RT-PCR,IFA,Western-blot证实该稳定转染细胞系可以表达多表位基因. 结果:构建了真核表达载体pcDNA3.1(-)-CtEm,建立了稳定转染的P815细胞系. 结论:构建HCV多表位基因的真核表达载体,稳定转染P815细胞,为进一步在疫苗研究中分析 CTL功能建立了靶细胞.
作者：韦三华；尹文；雷迎峰；胡兴斌；杨敬；吕欣；孙梦宁；徐志凯
来源：第四军医大学学报 2006 年 27卷 1期
