目的:建立丙型肝炎病毒包膜区基因的真核表达载体,并对表达产物进行鉴定,同时测定表达产物与抗HCV阳性血清的反应情况.方法:用限制性内切酶XbaⅠ和EcoRⅠ从原核表达载体pMS-CVE1中切下HCV E1区的基因片段,并将其克隆到真核表达载体PcDNA3.1中,阳性克隆经SmaⅠ和XbaⅠ双酶切鉴定后,用磷酸钙共沉淀法将其转染入小鼠骨髓瘤细胞SP2/0中,同时利用Western Blot方法对表达产物进行鉴定; 测定表达产物与20份抗HCV阳性血清标本和10份抗HCV阴性的血清标本的反应性.结果:经酶切过夜后从原核表达载体上切下的基因片段与经过同样双酶切的真核表达载体PcDNA3.1连接,阳性克隆经SmaⅠ和XbaⅠ酶切后产生了预期大小的354bp的片段.经磷酸钙转染,产生了具有对G418抗性的细胞克隆,经Western Blot方法用抗HCV E1区合成肽抗原的单抗检测表达产物,产生了特异的反应;并证实该表达产物与HCV患者的血清有特异反应.经Western Blot证实在抗HCV阳性血清中有35
作者：高建恩；陶其敏；马大龙；冯百芳；蒋栋
来源：北京医科大学学报 2000 年 32卷 1期
