目的 从滇龙胆叶片中克隆单萜合成关键酶环烯醚萜氧化酶(GrIDO)基因及其启动子序列,并进行序列分析.方法 根据滇龙胆转录组GrIDO基因序列设计基因特异性引物,使用RT-PCR方法克隆GrIDO基因的开放阅读框(open reading frame,ORF)序列,基于在线软件对GrIDO基因序列进行生物信息学分析.同时,根据GrIDO基因ORF序列,设计特异性引物,采用PCR法对该基因启动子序列进行扩增,并进行序列分析.结果 GrIDO基因(GenBank登录号KP722034)ORF全长l 557 bp,编码518个氨基酸;GrIDO蛋白相对分子质量58 920,理论等电点8.40,属于细胞色素P450超家族成员,可能定位于叶绿体;无信号肽,为亲水不稳定蛋白,主要由α-螺旋(51.07％)和环(42.69％)构成;GrIDO蛋白与长春花CrIDO蛋白具有较高的相似性(85.83％),且亲缘关系较近.GrIDO基因启动子(GenBank登录号KT428570)长720 bp,具有TATA-box和CAAT-box,还具有参与脱落酸和茉莉酸甲酯应答的顺式作用元件、光应答元件和MYB结合位点.结论 GrIDO基因表达受多种因素调控.克隆了GrIDO基因ORF及其启动子,为GrIDO基因的功能验证奠定基础.
作者：张晓东；李彩霞；赵青蓉；王元忠
来源：中草药 2018 年 49卷 18期
