背景与目的：由己建立的小鼠基因打靶模型证实，K-ras突变启动了胰腺癌前病变-胰腺上皮内瘤变(pancreatic intraepithelial neoplasia，PanIN)，p53、p16失活均可单独促进小鼠PanIN发展为浸润性胰腺癌。作为人胰腺癌中另一失活频率高发的抑癌基因Smad4，本课题组前期研究提示，应用RNA干扰技术沉默PanIN细胞株中内源性Smad4表达，促使PanIN细胞恶性转化。基于此目的，本研究进一步探讨siRNA干扰Smad 4基因对PanIN细胞体内外增殖及转移能力的影响，从而有助于阐明PanIN恶性转化的新机制。方法：构建和筛选能特异性静默PanIN细胞中Smad4表达的最佳siRNA稳定表达质粒,稳定转染最佳siRNA表达质粒进入PanIN细胞，用Zeocin筛选稳定转染克隆，挑选阳性克隆、扩增，稳定转染后细胞命名为PanIN-S。本研究运用细胞计数、克隆形成实验等分别比较两组在活细胞率和体外增殖能力的影响，同时为进一步验证Smad 4基因静默对PanIN细胞体外迁移、侵袭能力的影响，本研究采用Transwell和Mitigel assay检测其干扰前后体外运动、侵袭能力。动物实验中，建立PanIN及PanIN-S细胞组裸鼠移植瘤模型，并应用免疫组化方法检测并比较两组PCNA、VEGF和MMP-9的表达及其差异。结果：成功构建了Smad4基因siRNA体系；体外实验中与PanIN组相
作者：齐晓光；胡毅；汪进良；谈文龙；王琪；王立夫；Tuveson DA
来源：中国癌症杂志 2013 年 7期
