背景与目的：Bmi-1(B-cell specific moloneymurine leukemiavirus insertion site 1)基因是多梳基因家族的重要成员之一，主要通过调控INK4a/ARF位点来调节细胞的增殖和衰老。本研究旨在探讨Bmi-1-siRNA对具有INK4a/ARF位点的肺腺癌SPC-A1细胞生长和增殖的影响，并探讨其作用机制。方法：①本实验选用已确定有效的siRNA序列进行病毒包装，构建反转录病毒si-Bmi-1 pSUPERretro-neo，然后感染到SPC-A1细胞中，建立稳定表达Bmi-1-siRNA的肺癌细胞株。②利用RT-PCR和蛋白质印迹法(Western blot)技术分析Bmi-1基因在Bmi-1-siRNA转染后SPC-A1细胞中表达情况。③利用台盼蓝拒染法、MTT法、平板克隆形成实验和裸鼠实验，分析Bmi-1-siRNA对SPC-A1细胞体内外增殖能力的影响。④利用流式细胞术分析SPC-A1各组细胞的周期分布。⑤利用Western blot法分析增殖通路相关分子：p16INK4a、p53、Cyclin D1、PTEN和Ser473p-Akt等蛋白表达情况。结果：反转录病毒介导的Bmi-1-siRNA被转染后，有效抑制了SPC-A1细胞中Bmi-1基因的转录和表达，抑制了SPC-A1细胞的体内外增殖能力(P<0.01)，并使转染组细胞阻滞在G1期[(64.6±1.2)
作者：王艺芳；刘奔；刘纯青；郑翔宇；刘丹丹；朱杰；杨春辉；孟秀香
来源：中国癌症杂志 2014 年 5期
