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背景与目的:膀胱尿路上皮癌是泌尿统系最常见的肿瘤,术后易复发及转移,Yes相关蛋白(Yes associated protein,YAP)基因与膀胱癌关系密切,本研究探讨通过RNA干扰技术沉默膀胱癌T24细胞中YAP基因的表达,观察YAP基因沉默后对人膀胱癌T24细胞增殖、迁移能力的影响。方法:用阳离子脂质体转染试剂LipofectamineTM2000将靶向沉默YAP基因的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)序列转染至膀胱癌T24细胞株中,采用实时定量逆转录聚合酶链反应(quantitative real time-polymerase chain reaction, qRT-PCR)、蛋白质印迹法(Western blot)检测转染后T24细胞中YAP基因及蛋白的表达水平,细胞增殖活性检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)、Transwell迁移试验以及划痕实验观察siRNA在体外对人膀胱癌T24细胞增殖、迁移能力的影响。结果:转染siRNA后,YAP RNA和蛋白表达量同空白对照以及阴性对照组相比被显著抑制(RNA:F=93.91,P<0.0001;蛋白:F=4.62,P<0.05),CCK-8增殖活性实验结果显示,RNAi干扰YAP表达可以显著抑制膀胱癌T24细胞的增殖活性(12 h:F=6.00,P=0.037;24 h:F=41.72,P=0.0003;36 h:F=462.8,P<0.0001;48 h:F=236.6,P<0.0001;72 h:F=140.5,P<0.0001),通过Transwell实验

作者:胡光辉;徐亮;赖鹏;郭锥锋;刘欢;刘敏;王云;姚旭东;许云飞

来源:中国癌症杂志 2014 年 6期

知识库介绍

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作者:
胡光辉;徐亮;赖鹏;郭锥锋;刘欢;刘敏;王云;姚旭东;许云飞
来源:
中国癌症杂志 2014 年 6期
标签:
膀胱癌 Yes相关蛋白 RNA干扰技术 细胞增殖 细胞迁移 Bladder cancer Yes associated protein RNA interference Cell proliferation Cell migration
背景与目的:膀胱尿路上皮癌是泌尿统系最常见的肿瘤,术后易复发及转移,Yes相关蛋白(Yes associated protein,YAP)基因与膀胱癌关系密切,本研究探讨通过RNA干扰技术沉默膀胱癌T24细胞中YAP基因的表达,观察YAP基因沉默后对人膀胱癌T24细胞增殖、迁移能力的影响。方法:用阳离子脂质体转染试剂LipofectamineTM2000将靶向沉默YAP基因的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)序列转染至膀胱癌T24细胞株中,采用实时定量逆转录聚合酶链反应(quantitative real time-polymerase chain reaction, qRT-PCR)、蛋白质印迹法(Western blot)检测转染后T24细胞中YAP基因及蛋白的表达水平,细胞增殖活性检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)、Transwell迁移试验以及划痕实验观察siRNA在体外对人膀胱癌T24细胞增殖、迁移能力的影响。结果:转染siRNA后,YAP RNA和蛋白表达量同空白对照以及阴性对照组相比被显著抑制(RNA:F=93.91,P<0.0001;蛋白:F=4.62,P<0.05),CCK-8增殖活性实验结果显示,RNAi干扰YAP表达可以显著抑制膀胱癌T24细胞的增殖活性(12 h:F=6.00,P=0.037;24 h:F=41.72,P=0.0003;36 h:F=462.8,P<0.0001;48 h:F=236.6,P<0.0001;72 h:F=140.5,P<0.0001),通过Transwell实验