目的:构建含有CTLA4Ig基因的重组腺病毒载体,为下一步在动物模型体内表达和基因治疗提供基础.方法: 自行设计一对分别含有BglⅡ及HindⅢ酶切位点的CTLA4Ig基因上下游引物,以质粒PCDNA3.0/CTLA4Ig为模板,通过PCR扩增获得CTLA4Ig基因全部序列.片段回收以后经BglⅡ及HindⅢ双酶切,定向插入到腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV的启动子下游BglⅡ及HindⅢ位点之间,获得重组质粒pAdTrack-CTLA4Ig.通过BglⅡ/HindⅢ双酶切、PCR及插入片段测序鉴定后,将正确重组体pAdTrack-CTLA4Ig与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转化BJ5183细菌.同源重组后用选择性培养基筛选阳性克隆,提取质粒用脂质体介导转染293细胞,通过观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达及PCR扩增目的基因等方法鉴定重组的腺病毒.结果:成功构建了含有CTLA4Ig基因的重组腺病毒,病毒滴度为1.65×1012PFU/L. 结论: 该重组腺病毒的构建为下一步研究其在哺乳动物细胞内表达、研究CTLA4Ig的生物学活性及移植排斥、自身免疫病的基因治疗提供了一定的基础.
作者：郭小荑；邓宇斌；陆才生；李树浓
来源：中国病理生理杂志 2003 年 19卷 5期
