目的: 利用膜片钳技术,研究咖啡因对钙激活钾通道(calcium-activated potassium channel,K_(Ca))的作用机制,及咖啡因存在时兰尼定(ryanodine)对K_(Ca)的影响以阐明冠状动脉平滑肌的调控机制.方法: 采用急性酶分离方法,应用膜片钳单通道电流记录技术记录猪冠状动脉平滑肌钿胞上K_(Ca)电流活动.电流信号经放大、滤波及A/D、D/A转换后输入微机进行采样和储存.应用PCLAMP 9.0软件系统进行数据采集及分析.结果: 在内面向外式(inside-out)膜片下, 咖啡因(0.1、0.5、1.0、5.0 mmol/L)可浓度依赖性地增加通道开放概率,而对电流幅值无明显影响,开放概率增加是通过明显缩短平均关闭时间实现的(n=8,P<0.01);洗去药物后通道活性可以恢复到对照水平;5.0 mmol/L咖啡因对K_(Ca)激活作用最大(P<0.01).在细胞贴附式(cell-attached)膜片上, 咖啡因激活K_(Ca)后,ryanodine(10-40 μmol/L)浓度依赖性地抑制通道开放概率,开放时间缩短,关闭时间延长,对电流幅度无明显影响.结论: 在inside-out膜片下, 咖啡因能够直接激活猪冠状动脉平滑肌细胞K_(Ca)通道.在cell-attached构型上,ryanodine 可通过胞内一定的信号通路浓度依赖性间接抑制咖啡因对K_(Ca)激活.
作者：仲维高；杨艳；曾晓荣；崔跃；孔天翰
来源：中国病理生理杂志 2010 年 26卷 1期
