目的:通过腺病毒介导的RNA干扰技术沉默一种新的脂联素(APN)受体T-cadherin的表达,并建立心肌细胞缺氧/复氧(H/R)模型,观察T-cadherin对H/R所致心肌细胞凋亡的影响.方法:选用原代培养72 h的心肌细胞进行实验,随机分为5组:(1)空白对照组:心肌细胞正常培养；(2)H/R组；(3) APN +H/R组；(4)Ad-T-cadherin-siRNA+ APN+ H/R组；(5) Ad-HK(腺病毒阴性对照)+APN+ H/R组.首先,确定最适合的腺病毒感染滴度,RT-PCR和Western blotting检测腺病毒介导的干扰RNA对T-cadherin表达的影响效果；其次,通过流式细胞术和TUNEL检测心肌细胞的凋亡.结果:原代培养获得高纯度的乳鼠心肌细胞.腺病毒感染的最佳MOI值为100,48h后腺病毒的感染效率和红色荧光蛋白表达最强,其效率高于90％.RT-PCR和Western blotting证实腺病毒介导的siRNA转染的心肌细胞T-cadherin mRNA和蛋白水平均明显下降(P＜0.05).Ad-T-cadherin-siRNA+APN +H/R组心肌细胞凋亡率与APN+ H/R组相比显著升高(P＜0.05),与H/R组相比差异无统计学意义(P＞0.05).结论:重组腺病毒Ad-T-cadherin-siRNA能够在体外高效感染原代心肌细胞,并成功降低T-cadherin在心肌细胞的表达；低表达的T-cadherin阻断了脂联素对缺氧/复氧诱导的乳鼠心肌细胞凋亡的抑制作用.

作者：孙亚丽；边云飞；孙旭；刘改珍；白瑞；肖传实

来源：中国病理生理杂志 2013 年 29卷 5期