目的:探讨唯BH3域蛋白Bim(Bcl-2 interacting mediator of cell death)在缺氧所致大鼠心肌细胞凋亡中的作用.方法:在体外原代培养出生l～3d的大鼠心肌细胞,并用抗α-横纹肌肌动蛋白免疫组化法进行鉴定.设计并化学合成3对靶向bim的siRNA,用脂质体法将siRNA转染心肌细胞,筛选沉默效率最高的siRNA.实验分组:(1)正常对照组；(2)缺氧组；(3)缺氧+脂质体组；(4)缺氧+阴性对照siRNA组；(5)缺氧+bim-siRNA 组.倒置显微镜下观察心肌细胞的搏动频率和节律.全自动生化分析术检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的含量,用MTT法测定心肌细胞的存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率.Western blotting检测细胞Bim、Bax、Bcl-2和p-p38 MAPK和p38 MAPK蛋白的表达.结果:免疫组化鉴定证实大鼠心肌细胞原代培养成功.bim-siRNA转染均能有效沉默bim基因的表达(P＜0.01),其中第2对沉默效率最高,达到86.73％.缺氧使心肌细胞的搏动频率显著减慢,节律不规则,而沉默bim基因的表达能使细胞搏动频率增加.缺氧损伤导致细胞培养液中LDH含量较空白对照组明显增加(P＜0.01),心肌细胞存活率明显下降(P＜0.05),细胞凋亡率较空白对照组明显增加(P＜0.01),转染bim-siRNA后细胞培养液中LDH含量显著减少,细胞存活率升高,细胞凋亡率下降.缺氧损伤导致心肌
作者：夏珍；李菊香；丁浩；孙国芳；洪葵；吴延庆；程晓曙
来源：中国病理生理杂志 2013 年 29卷 10期
