目的：探讨激活Nodal信号通路在小鼠胚胎干细胞（ embryonic stem cells，ESC）向定型内胚层（ de－finitive endoderm，DE）分化中的作用，寻找小鼠ESC向DE分化的最佳培养体系。方法：根据培养基的不同，实验分为3组：胚胎干细胞组（基础培养＋LIF）、自然分化组（基础培养基）和activin A组（基础培养基＋50μg／L activin A）。细胞培养1～7 d，收集不同作用时点（1、3、5、7 d）的细胞及细胞爬片。用流式细胞术检测CXCR4阳性细胞的比例；免疫细胞化学法检测CXCR4蛋白的表达；Western blot检测OCT4及CXCR4蛋白的表达。结果：流式细胞术检测结果提示，随着培养时间的延长，CXCR4阳性细胞的比例，胚胎干细胞组在1～7 d无明显变化，自然分化组和activin A组逐渐增高，第5天达高峰（P＜0．05），其中activin A组最高（P＜0．05）。细胞免疫组化结果显示CX－CR4阳性细胞呈棕褐色或棕黄色。 Western blot的结果提示，随着培养时间的延长，胚胎干细胞组OCT4和CXCR4蛋白表达无明显变化；自然分化组和activin A组的CXCR4蛋白的表达逐步增高，OCT4蛋白的表达逐步下降，第5天达高峰（P＜0．05），其中activin A组的表达最明显（P＜0．05）。结论：在小鼠ESC分化过程中，在诱导培养的第5天， DE的比例最高。激活No
作者：钟娃；夏忠胜；欧阳慧；袁宇红；于涛；单体栋；陈其奎
来源：中国病理生理杂志 2015 年 11期
