目的:探讨miR-483-5p对人胰岛素样生长因子2(IGF2)基因P3启动子驱动的mRNA(P3 mRNA)表达的影响及其在肝细胞癌发生发展中的作用.方法:(1)采用real-time PCR检测人肝癌细胞株Huh7、Hep3B、Bel-7402、HepG2和SMMC-7721,人正常肝细胞株HL-7702,83例人肝细胞癌组织和配对的癌旁组织,22例正常肝组织中miR-483-5p和P3 mRNA的表达水平,并应用Pearson相关分析评估P3 mRNA与miR-483-5p表达水平之间的关系.(2)将IGF2基因P3 mRNA的5'端非翻译区(5'UTR)克隆入pGL3启动子载体,构建P3 mRNA 5'UTR野生型(pGL3-P3-5'UTR-WT)及P3 mRNA 5'UTR突变型(pGL3-P3-5'UTR-MUT)重组萤光素酶报告质粒,将其分别与miR-483-5p mimic、miR-483-5p inhibitor及scrambled control共转染HeLa、293T及Huh7细胞,采用双萤光素酶报告系统检测萤光素酶活性.(3)分别将miR-483-5p mimic、miR-483-5p inhibitor及scrambled control 转染Huh7及Hep3B肝癌细胞,应用real-time PCR检测这2种肝癌细胞P3 mRNA表达水平的变化.(4)应用real-time PCR检测肝癌细胞Huh7及Hep3B的细胞核和细胞质中miR-483-5p的表达水平;应用核连缀实验(nuclear run-on assay)分析miR-483-5p对P3 mRNA转录的影响;应用RNA稳定性实验分析miR-483-5p对P3 mRNA稳定性影响.(5)应用体外

作者：马彦；朱翠萍；胡建军；李悅行；王敏；汤绍辉

来源：中国病理生理杂志 2018 年 34卷 4期