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目的:探讨微小 RNA-17(miR-17)对大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)衰老的影响.方法:取 SD大鼠胸主动脉中层,分离并原代培养 VSMCs.取第 4~6代 VSMCs,将细胞分为 6组:诱导衰老+miR-17过表达(A-miR-17)组,诱导衰老+miR-17敲减(A-anti-miR-17)组,诱导衰老对照(A-control)组,正常培养+miR-17过表达(N-miR-17)组,正常培养+miR-17敲减(N-anti-miR-17)组和正常培养对照(N-control)组.通过脂质体将 miR-17-mimics和 miR-17-inhibitor转入 VSMCs,24 h后采用 D-半乳糖诱导细胞衰老,在加入 D-半乳糖后的第 3天采用β-半乳糖苷酶染色方法鉴定细胞衰老;分别采用实时荧光定量 PCR和免疫组化方法检测血管平滑肌细胞 miR-17 、p16和 p21 的表达.结果:(1)与 A-control组相比,VSMCs 内 miR-17的表达在 A-miR-17组显著升高(P<0.01),而在 A-anti-miR-17组显著降低(P < 0.01);(2)D-半乳糖诱导 3 天后,A-anti-miR-17组 β-半乳糖苷酶阳性细胞显著高于 A-miR-17组;(3)A-miR-17组 VSMCs中 p21蛋白和 mRNA表达显著低于 A-control组(P<0.01),而 A-anti-miR-17组 p21蛋白和 mRNA表达显著高于 A-miR-17组(P <0.01).结论:miR-17能够抑制 D-半乳糖诱导的大鼠 VSMCs衰老,其机制与抑制 p21过表达有关.

作者:李书国;刘菊菊;叶明;邓娟娟;张丹;彭艳

来源:中国病理生理杂志 2019 年 35卷 12期

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作者:
李书国;刘菊菊;叶明;邓娟娟;张丹;彭艳
来源:
中国病理生理杂志 2019 年 35卷 12期
标签:
微小RNA-17 血管平滑肌细胞 细胞衰老 p21蛋白
目的:探讨微小 RNA-17(miR-17)对大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)衰老的影响.方法:取 SD大鼠胸主动脉中层,分离并原代培养 VSMCs.取第 4~6代 VSMCs,将细胞分为 6组:诱导衰老+miR-17过表达(A-miR-17)组,诱导衰老+miR-17敲减(A-anti-miR-17)组,诱导衰老对照(A-control)组,正常培养+miR-17过表达(N-miR-17)组,正常培养+miR-17敲减(N-anti-miR-17)组和正常培养对照(N-control)组.通过脂质体将 miR-17-mimics和 miR-17-inhibitor转入 VSMCs,24 h后采用 D-半乳糖诱导细胞衰老,在加入 D-半乳糖后的第 3天采用β-半乳糖苷酶染色方法鉴定细胞衰老;分别采用实时荧光定量 PCR和免疫组化方法检测血管平滑肌细胞 miR-17 、p16和 p21 的表达.结果:(1)与 A-control组相比,VSMCs 内 miR-17的表达在 A-miR-17组显著升高(P<0.01),而在 A-anti-miR-17组显著降低(P < 0.01);(2)D-半乳糖诱导 3 天后,A-anti-miR-17组 β-半乳糖苷酶阳性细胞显著高于 A-miR-17组;(3)A-miR-17组 VSMCs中 p21蛋白和 mRNA表达显著低于 A-control组(P<0.01),而 A-anti-miR-17组 p21蛋白和 mRNA表达显著高于 A-miR-17组(P <0.01).结论:miR-17能够抑制 D-半乳糖诱导的大鼠 VSMCs衰老,其机制与抑制 p21过表达有关.