目的 构建红系发育相关基因(erythoid develop associated gene,EDAG-1)原核表达系统并制备其单克隆抗体.以进一步研究EDAG-1调控细胞增殖、分化及凋亡的分子机制,探讨其临床应用前景.方法 本实验选用pGEX-4T-3载体,构建含GST标签的pGEX-4T-3-EDAG-1原核表达载体,经过对表达体系进行优化,IPTG诱导.获得较高效率的GST-EDAG-1融合蛋白表达,纯化该蛋白,对BALB/C小鼠进行免疫.将免疫后小鼠的脾脏细胞和来源于同种系小鼠的SP2/0骨髓瘤细胞(次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶缺陷型和胸腺核苷激酶缺陷型)采用PEG介导的融合方式进行细胞融合实验,通过HAT培养基对融合细胞进行初步筛选,进而通过ELISA实验对所获得杂交瘤细胞进行抗体表达验证.结果 成功构建了含GST标签的pGEX-4T-3-EDAG-1原核表达载体,并表达出较高纯度的EDAG-1蛋白,获得表达EDAG-1抗体的单克隆杂交瘤细胞.通过对单克隆抗体的初步实验表明,所获单克隆抗体具有很好的特异性,较低的背景和较好的稳定性.结论 通过原核表达途径制备EDAG-1单克隆抗体是可行的,所获单克隆抗体具有很好的特异性,较低的背景和较好的稳定性.
作者：程双宁；杨晓明；陈兵；唐晓明；郑红；汪思应
来源：中国基层医药 2007 年 14卷 7期
