目的 构建周期型马来丝虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂(BmC PI)基因真核表达载体pcDNA3.1-BmCPI,并观察其在小鼠体内的免疫应答反应.方法 以周期型马来丝虫总RNA为模板,逆转录PCR (RT-PCR)扩增目的基因片段.与pGEM-T Easy克隆载体连接,筛选出阳性克隆,经PCR和双酶切鉴定后,亚克隆至真核表达质粒pcDNA3.1,构建pcDNA3.1-BmCPI表达载体.将48只小鼠随机分为4组,每组12只,分别为健康对照组、空质粒组、pcDNA3.1-BmCPI组和pcDNA3.1-BmCPI/CpG组,分别注射PBS 100μl、空质粒pcDNA3.1 100 μg、重组质粒pcDNA3.1-BmCPI100 μg和重组质粒pcDNA3.1-BmCPI 100 μg+佐剂CpG 30 μg,采用左后腿胫前肌注射免疫.每2周1次,共3次,于末次免疫后第4周,用RT-PCR方法检测小鼠注射部位肌肉组织内目的基因转录情况.于末次免疫后第4和第6周,用噻唑蓝(MTT)法检测小鼠T淋巴细胞刺激增殖水平.于末次免疫后第2、4和6周,用ELISA法检测小鼠血清γ干扰素(IFN-γ)和白介素4(IL-4)水平.结果 成功构建了pcDNA3.1-BmCPI真核表达载体,基因片段大小为621 bp.该真核表达载体免疫小鼠后,从小鼠肌肉组织扩增出目的基因.末次免疫后第4和第6周,2个免疫组小鼠淋巴细胞刺激增殖指数均显著高于健康对照组和空质粒组(53.789± 1.937、59.735±4.139和61.975±

作者：张赛楠；方政；陆施娟；王慧；徐邦生

来源：中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2011 年 29卷 6期