目的:明确长链非编码RNA核富集转录本1(lncRNA NEAT1),miR-486,FOX01之间的相互关系,探讨三者在椎间盘退变(intervertebral disc degeneration,IDD)组织中的表达及相关性,阐明NEAT1通过调控miR-486/FOX01轴参与IDD进展的具体机制.方法:利用双荧光素酶报告基因、RNA结合蛋白免疫沉淀(RNA binding protein immunoprecipitation,RIP)试验等明确NEAT1,miR-486与叉头框蛋白01(forkhead box protein 01,FOXO1)的生物学关系;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)、免疫印迹(Western blot)检测15例对照和30例IDD髓核组织中NEAT1,miR-486与FOXO1的表达,统计其与Pfirrmann分级的关系;采用白细胞介素13(interleukin-1β,IL-1β)诱导法构建髓核细胞退变模型,NEAT1小干扰RNA(NEAT1 small interfering RNA,si-NEAT1)和过表达质粒转染髓核细胞构建细胞沉默或过表达模型;细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)和流式细胞术检测髓核细胞增殖和凋亡;RT-qPCR检测细胞NEAT1与miR-486表达;Western blot检测FOXO1 及细胞外基质(extracellular matrix,ECM)中聚集蛋白聚糖(aggrecan)、二型胶原(collagen Ⅱ)、基质金属蛋白酶-13(matrix metalloproteinase,MMP-13)和
作者:柴星宇;宋将;朱静华;郝清海;袁崇明;刘涛
来源:中国脊柱脊髓杂志 2022 年 32卷 7期