目的 建立特异、快速、灵敏的TaqMan实时荧光定量聚合酶链反应(TaqMan-based Real-time PCR)用于西尼罗病毒(WNV)核酸检测,为WNV的感染诊断和流行病学监测奠定技术基础.方法 根据文献公开发表的WNV核酸检测引物和TaqMan探针,优选最佳引物探针.应用DNAWorks 2.4在线软件设计8条寡核苷酸片段,基于PCR合成包含引物探针扩增区域的230个核苷酸作为WNV模拟核酸.并对TaqMan-based Real-time PCR条件进行优化,验证该方法的特异性、灵敏度.结果 该方法对WNV核酸检测有高度特异性,与流行性乙型脑炎、登革热1～4型等虫媒病毒均无交叉反应,对构建的DNA检测灵敏度达100拷贝/反应.结论 TaqMan-based Real-time PCR是一种快速检测WNV特异、敏感的方法,适用于WNV的早期感染诊断和流行病学监测.
作者：徐昌平；卢亦愚；严菊英；冯燕；高筱萍
来源：中国媒介生物学及控制杂志 2008 年 19卷 2期
