目的:探讨热休克蛋白90α的生物学功能,获得高质量及充足的HSP90α蛋白.方法:采用PCR的方法扩增HSP90αcDNA5'端424 bp片段,在起始密码子位置制造一个NcoI酶切位点,将PCR产物克隆到中间载体,再通过合适的酶切位点将其余片段连接到此载体,形成一个带有NcoI突变位点的HSP90αcDNA全长克隆.最终将HSP90α全部编码cDNA插入到pET-16b表达载体中.结果:经诱导表达,SDS-PAGE凝胶电泳分离显示在分子量大约83 kD处有一诱导蛋白带.Western Blot证明表达产物与抗HSP90α抗血清有特异的免疫反应.结论:构建成了T7启动子控制下的HSP90α表达质粒.
作者：乔绘红；赵玫；施一江；袁兴华；范云霞；周纯；徐枫；黄常志
来源：中国免疫学杂志 2000 年 16卷 3期
