目的:构建EB病毒潜伏期膜蛋白2A重组腺病毒,研究EB病毒相关肿瘤治疗性疫苗.方法:利用RT-PCR扩增出EB病毒B95.8株潜伏期膜蛋白2A(LMP2A)全部编码蛋白的基因,并克隆至pGEM-T载体中.并将LMP2A cDNA插入E1、E3区替代的腺病毒载体pAX1CW,选择正确的克隆pAX1CW-LMP2A与Ad5 DNA-末端肽复合体共转染293细胞,通过同源重组获得复制缺陷型的重组腺病毒.提取重组腺病毒转染的293细胞DNA,通过酶切初步鉴定.选择阳性克隆感染CV1细胞,通过流式细胞仪和激光共聚集显微镜分析LMP2A蛋白表达情况.结果:挑选同源重组17个克隆中有9个为阳性克隆,扩增到的病毒滴度为2.3×108 pfu/ml.用MOI=100的重组腺病毒感染CV1细胞,48 h后在激光共聚焦显微镜下可见LMP2A蛋白表达于CV1细胞膜上,经流式细胞仪检测LMP2A蛋白表达阳性细胞数为94.4
作者：彭光勇；姚堃；许琳；徐江英；谢芳艺
来源：中国免疫学杂志 2002 年 18卷 3期
